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  首页<赢咖娱乐>首页主管【95820】炊事纤维的测定_理学_上等造就_造就专区。扼要先容材料的重要实质,以取得更众的合切

  “粗纤维”一词最早用于养分学商量,并被以为是对人体不起养分用意的一种非养分 因素。然而近年来领会本领的成长和对这种“非养分素”领会的升高,“粗纤维”也被“炊事 纤维”所取代,况且付与更丰裕的实质。炊事纤维大致分为二类,一类为可溶性的,一 类为弗成溶性的, 二者团结即为总的炊事纤维。 它重要席卷植物细胞壁的因素如纤维素、 半纤维素、果胶、木质素、角质和二氧化硅等因素,最早曾有中型洗涤剂法和酸性洗涤 剂法等,测定结果常不行席卷全面。本章所先容的 Englist 筑设的、AOAC 推选的门径。 它重要测定为可溶性的炊事纤维、弗成溶性炊事纤维和总炊事纤维三种。 炊事纤维本质上属于碳水化合物的规模。 炊事纤维的物化特征重要席卷 5 个方面: (1)很高的持水力。 (2)对阳离子有纠合和换取才力。 (3)对有机化合物有吸附螯适用意。 (4)具有犹如填充剂的富裕用意。 (5)可转变肠道体系中的微生物群系构成。 炊事纤维的测定门径重要有三种,赢咖2席卷非酶-重量法、酶重量法和酶化学法。非酶重量 法是一个比拟陈腐的门径,只可用于粗纤维的测定。而中性洗涤剂法也只可测定不溶性 的炊事纤维。酶重量法却能够测定总炊事纤维(席卷可溶和弗成溶性炊事纤维) ,也是 AOAC 的程序门径。酶化学法是 AOAC 最新招认的另一个程序门径,但此法易受仪器条 件的局限,分歧用于日常实践室。目前邦标采用的依然中性洗涤剂法,食品因素外中列 出的数据都是不溶性炊事纤维,于是下文先先容不溶性炊事纤维的测定门径。 (一)中性洗涤剂法 1. 道理 正在中性洗涤剂的消化用意下,样品中的糖、淀粉、卵白质、果胶等物质被融解除去,不 能消化的残渣为不溶性炊事纤维,重要席卷纤维素、半纤维素、木质素、角质和二氧化 硅等,并席卷不溶性灰分。 2. 合用鸿沟 GB 12394—90 合用于各种植物性食品和含有植物性食品的搀和食品中不溶性炊事纤维 的测定。 3. 仪器 (1)烘箱:110~130℃。 (2)恒温箱: (37±2)℃。 (3)纤维测定仪。 (4)如没有纤维测定仪,可由下列部件构成: 电热板:带控温装备。 高型无嘴烧杯:600mL。 玻料坩埚:容量 50mL,孔径 40~60μm。 回流冷凝装备。 抽滤装备:由抽滤瓶、抽滤垫及水泵构成。 4. 试剂 实践用水均为蒸馏水,试剂不加讲明均为领会纯试剂。 (1)无水亚硫酸钠。 (2)石油醚:沸程 30~60℃。 (3)丙酮。 (4)甲苯。 (5)中性洗涤剂溶液:将 18.61gEDTA 二钠盐和 6.81g+水合四硼酸钠置于烧杯中,加 水约 150mL,加热使之融解,将 30g 月桂基硫酸钠和 10mL 乙二醇独溶于约 700mL 热水中,团结上述两液,再将 4.56g 无水磷酸氢二钠溶于 150mL 热水中,再并入上述溶 液中,用磷酸治疗上述搀和液至 pH6.9~7.1,终末加水至 1000mL。 (6) 磷酸盐缓冲液: 38.7mL 0.1mol/L 磷酸氢二钠和 61.3mL 0.1mol/L 磷酸二氢钠搀和 由 而成,pH 为 7。 (7)2.5%α—淀粉酶溶液:称取 2.5gα—淀粉酶(Sigma 公司,VI-A 型,产物号 6880) 溶于 100mLpH7 的磷酸盐缓冲溶液中,离心,过滤,滤过的酶液备用。 (8)耐热玻璃棉:耐热 130℃,美邦 Corning 玻璃厂出品,PYREX 牌。 5. 操作措施 (1)样品制备: ① 粮食:磨粉,过 20 目筛(1mm) ,贮于塑料瓶内,盖紧瓶塞生存,备用。 ② 蔬菜及其他植物性食品:取其可食部,用水洗净,纱布吸去水分,打碎,沸合匀称 后备用。 ③ 脂肪含量逾越 10%样品:需先去除脂肪,即样品 1.00g,用石油醚提取 3 次,每次 10mL。 (2)取样 0.5~1.0g,加 100mL 中性洗涤剂溶液,再加 0.5g 无水硫酸钠。 (3)电炉加热,5min 内使其煮沸,移至电热板上,维持微沸 1h。 (4)于玻料坩埚中铺 1g 玻璃棉,移至烘箱中,110℃4h,取出置干燥器中,晾至室温, 万分之一天平称重,得 m1。 (5)将煮沸后样品趁热倒入滤器,用水泵抽滤。用 600mL 热水(90~100℃) ,分数次 洗烧杯及滤器,抽干。洗净滤器下部的液体和泡沫,塞上橡皮塞。 (6)于滤器中加酶液,液面需笼盖纤维,用细针挤压掉个中气泡,加几滴甲苯,盖上 外玻皿,37℃恒温箱中歇宿。 (7)取出滤器,除去底部塞子,抽去酶液,并用 300mL 热水分数次洗去残留酶液,用 碘液检验,如有残留,赓续加酶水解,如淀粉已除尽,抽干,再以丙酮洗 2 次。 (8)将滤器置烘箱中,110℃4h,取出,置干燥器中,晾至室温,切确称重,得 m2。 6. 谋略 式中 ω——样品中不溶性炊事纤维的含量,%; m1——滤器加玻璃棉的质地,g; m2——滤器加玻璃棉及样品中纤维的质地,g; m——样品格地,g。 7. 提神事项 (1)因酶配成溶液后其生机会随时代伸长而低落,从而影响酶解功能,于是酶溶液需 当天现配。 (2)过滤时若遭遇操作疾苦,可采纳滴加淀粉酶和将样品称重淘汰至 0.3g 的门径来加 疾过滤。 (3)每次实践用完的坩埚去除玻璃棉,若玻板上残渣较众,可用重铬酸钾洗液浸泡数 小时后取出,用水冲洗洁净以备下次实践运用。 (二)酶-重量法 1. 道理 样品分辩用 α-淀粉酶、 卵白酶、 葡萄糖苷酶实行酶解消化以去除卵白质和可消化的淀粉。 总炊事纤维(TDF)是先酶解,然后用乙醇浸淀,再将浸淀物过滤,将 TDF 残渣用乙醇 和丙酮冲洗,干燥称重。不溶性和可溶性炊事纤维(IDF 和 SDF)是酶解后将 IDF 过滤, 过滤后的残渣用热水冲洗,经干燥后称重。SDF 是将上述滤出液用 4 倍量的 95%乙醇浸 淀,然后再过滤,干燥,称重。TDF、IDF 和 SDF 量通过卵白质、灰分含量实行校正。 2. 合用鸿沟 本门径合用于各种植物性食品和保健食物(AOAC991.43) 。 3. 仪器 (1)烧杯:400mL 或 600mL 高脚型。 (2) 过滤用坩埚: 玻料滤板, 美邦试验和质料学会 (ASTM) 40~60μm, Pyrex 60mL Corning ( No.36060 buchner,或一律的) 。如下措置: ① 正在灰化炉 525℃灰化歇宿。炉温降至 130℃以下取出坩埚。 ② 用真空装备移出硅藻土和灰质。 ③ 室温下用 2%洗濯溶液浸泡 1h。 ④ 用水和去离子水冲洗坩埚;然后用 15mL 丙酮冲洗然后风干。 ⑤ 正在干燥的坩埚中加 0.5g 硅藻土,正在 130℃烘干恒重。 ⑥ 正在干燥器中冷却 1h,记实坩埚加硅藻土质地,切确至 0.1mg。 (3)真空装备: ① 真空泵或抽气机行动限制装备。 ② 1L 的厚壁抽滤瓶。 ③ 与抽滤瓶相配套的桷皮圈。 (4)振荡水浴箱: ① 主动控温使温度能维持正在(98±2)℃。 ② 恒温限制正在 60℃。 (5)天平:领会级,切确到±0.1mg。 (6)马福炉:温度限制正在(525±5)℃。 (7)干燥箱:温度限制正在 105℃和(130±3)℃。 (8)干燥器:用二氧化硅或一律的干燥剂。干燥剂两周一次正在 130℃烘干歇宿。 (9)pH 计:提神温控,用 pH4.0、7.0 和 10.0 缓冲液标化。 (10)移液管及套头:容量 100μL 和 5mL。 (11)分拨器或量筒: ①(15±0.5)mL,供分拨 78%的乙醇、95%的乙醇以及丙酮。 ②(40±0.5)mL,供分拨缓冲液。 (12)磁力搅拌器和搅拌棒。 4. 试剂 全经过运用去离子水,试剂不加讲明均为领会纯度剂。 (1)乙醇溶液: ① 85%:加 895mL95%乙醇正在 1L 量筒中,用水稀释至刻度。 ② 78%:加 821mL95%乙醇正在 1L 量筒中,用水稀释至刻度。 (2)丙酮。 (3)供领会用酶:正在 0~5℃下储存。 ① 热巩固 α-淀粉酶溶液:Cat. No. A3306,Sigma Chemical Co.,St.Louis,MO63178,或 Termamyl 300L,Cat. No. 361-6282,Novo-Nordisk,Bagsvaerd,Denmark,或等效的 酶。 ② 卵白酶:Cat. No. P3910,Sigma Chemical Co.,或等效的。当天用 MES/TRIS 缓冲液中 现配 50mg/mL 酶溶液。 ③ 淀粉葡糖苷酶溶液:Cat. No. AMG A9913,Sigma Chemical Co.,或等效的。 (4)硅藻土:酸洗(Celite 545 AW,No. C8656,Sigma Chemical Co.,或等效的) 。 (5)洗涤液:两者挑一。 ① 铬酸:120g 重铬酸钠 Na2Cr2O7·2H2O,1000mL 蒸馏水和 1600mL 浓硫酸。 ② 实践室用液体明净剂, 打定急需洗濯的 (Micro, International Products Corp., Trenton, NJ08016,或等效的) 。用水配制 2%溶液。 (6)MES-TRIS 缓冲液:0.05mol/L,温度正在 24℃时 pH 为 8.2。 ① MES:2-(N-吗啉代)磺酸基乙烷(No.M-8250,Singma Chemical Co.或等效的) 。 ② TRIS:三羟(羟甲基)氨基甲烷(No.T-1503,Sigma Chemical Co.或等效的) 。 正在 1.7L 的蒸馏水中融解 19.52gMES 和 12.2gTRIS,用 6mol/L NaOH 调 pH 到 8.2,用水定 容至 2L[提神:24℃时的 pH 为 8.2,然而,即使缓冲液温度正在 20℃,pH 就为 8.3,即使 温度正在 28℃,pH 为 8.1。为了使温度正在 20~28℃之间,需遵照温度调理 pH]。 (7)HCl 溶液:0.561mol/L,加 93.5mL 6mol/L 盐酸到 700mL 水中,用水定容 1L。 5. 操作门径 (1)样品制备: ① 固体样品:即使样品粒度>0.5mm,研磨后过 0.3~0.5mm(40~60 目)筛。 ② 高脂肪样品:即使脂肪含量>10%,用石油醚去脂。每克样品用 25mL,每次提取完 静置须臾再小心将烧杯倾斜,迟缓将石油醚倒出,共洗 3 次。 ③ 高碳水化合物样品:即使样品干重含糖>50%,用 85%乙醇去除糖分,每克样品每 次 10mL,共洗 3 次轻轻倒出,然后正在 40℃烘箱中往往翻搅干燥歇宿,并研磨过 0.5mm 筛。 (2)样品消化: ① 确切称取双份(1.000±0.005)g 样品(m1 和 m2) ,置于高脚烧杯中。 ② 正在每个烧杯中出席 40mL MES-TRIS 缓冲液, 正在磁力搅拌器上搅拌直到样品全体涣散 [提神:避免团块变成,使受试物与酶能充满接触]。 ③ 用热巩固的淀粉酶实行酶解措置:加 100μL 热巩固的淀粉酶溶液,低速搅拌。用铝 箔片将烧杯盖住,正在 95~100℃水浴中响应 30min[提神:肇始的水浴温度应到达 95℃]。 ④ 冷却:完全烧杯从水浴中移出,晾至 60℃。翻开铝箔盖,用刮勺将烧杯边沿的网状 物以及烧杯底部的胶状物刮离,以使样品也许全体的酶解。用 10mL 蒸馏水冲洗烧杯壁 和刮勺。 ⑤ 用卵白酶实行酶解措置: 正在每个烧杯中各出席 10μL 卵白酶溶液。 用铝箔盖住, 60℃ 正在 络续摇动响应 30min[提神:先河时的水浴温度应达 60℃],使之充满响应。 ⑥ pH 测定:30min 后,翻开铝箔盖,搅拌中出席 5mL 0.561mol/L HCl 至烧杯中。60℃时 用溶液或 1mol/L HCl 溶液调最终 pH 为 4.0~4.7[提神:当溶液为 60℃时检测和调理 pH, 由于正在较低温度时 pH 会偏高]。 ⑦ 用淀粉葡糖苷酶溶液酶解措置:搅拌同时加 100μL 淀粉葡糖苷酶溶液。用铝箔盖住, 正在 60℃络续振摇响应 30min,温度应恒定正在 60℃。 (3)测定: ① 总的炊事纤维测定:用乙醇浸淀炊事纤维:正在每份样品中,出席预热至 60℃的 95% 乙醇 225mL,乙醇与样品的体积比为 4:1。室温下浸淀 1h。 过滤装备:用 15mL78%乙醇将硅藻土潮湿和从头分散正在已称重的坩埚中。 用适度的抽力把坩埚中的硅藻土吸到玻板上。 酶解过滤,用 78%乙醇和刮勺移完全实质物微粒到坩埚中[提神:即使极少样品变成胶 质,用刮勺败坏外面,以加快过滤]。 抽线%乙醇和丙酮冲洗残渣各 2 次,将坩埚内的残渣 抽干后正在 105℃烘干歇宿。将坩埚置干燥器中冷却至室温。坩埚重量,席卷炊事纤维残 渣和硅藻土,切确称至 0.1mg。减去坩埚和硅藻土的干重,谋略残渣重。 ② 卵白质和灰分的测定: 取成对的样品中的一份测定卵白质, 用本书前述或 GB-960.52 门径测定。用(N×6.25 行动卵白质的转换系数) 。 领会灰分时用平行样的第二份正在 525℃灼烧 5h,正在干燥器中冷却,切确称至 0.1mg,减 去坩埚和硅藻土的质地,即为灰分质地。 ③ 不溶性炊事纤维测定:称适量样品按②实行酶解,过滤前用 3mL 水潮湿和从头分散 硅藻土正在预先措置好的坩埚上,维持抽气使坩埚中的硅藻土抽成匀称的一层。 过滤并冲洗烧杯,用 10mL70℃水洗残渣 2 次,然后再过滤并用水洗,迁移到 600mL 高 脚烧杯,保存用以测定可溶性炊事纤维,按④操作。 用抽滤装备,分辩用 15mL78%乙醇,95%乙醇和丙酮各冲洗残渣 2 次。 [提神:应实时用 78%乙醇、95%乙醇和丙酮冲洗残渣不然可形成不溶性炊事纤维数值 的增大] 按②用双份样品测定卵白质和灰分。 ④ 可溶性炊事纤维测定:将不溶性炊事纤维过滤后的滤液采集到 600mL 高脚烧杯中, 比照烧杯和滤过液,估摸体积。 加约滤出液 4 倍量已预热至 60℃的 95%乙醇。或者将滤液和洗过残渣的蒸馏水的搀和 液调至 80g,再出席预热至 60℃的 95%乙醇 320mL。 室温下浸淀 1h。下面按②测定总炊事纤维,从“潮湿和从头分散硅藻土……”。 6. 谋略 TDF、IDF、SDF 均用统一公式谋略。 炊事纤维(DF,g/100g)测定: 式中 m5、m6——双份样品残留物质质地,mg; m3、m4——分辩为卵白质和灰分质地,mg; m1、m2——样品格地,mg。